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Biochimica applicata (CTF)

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Applied biochemistry

 

Anno accademico 2018/2019

Codice attività didattica
FAR0025
Docente
Prof. Salvatore ADINOLFI (Titolare del corso)
[f003-c504] laurea magistrale in chimica e tecnologia farmaceutiche - a torino
Anno
2° anno
Tipologia
Caratterizzante
Crediti/Valenza
6
SSD attività didattica
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BIO/10 - biochimica
Erogazione
Tradizionale
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Lingua
Italiano
Frequenza
In parte obbligatoria
Tipologia esame
Orale
Prerequisiti
chimica organica, biochimica
 
 

Obiettivi formativi10 Black Negligee Women's Hechter Daniel Subtile IqRX6w

  • ITALIANO
  • ENGLISH

acquisizione delle conoscenze di base circa le metodologie applicate nella sperimentazione biochimica e biochimica clinica con particolare attenzione per la logica dell'impostazione degli esperimenti e della raccolta dati

 

Risultati dell'apprendimento attesi

  • ITALANO
  • ENGLISH

Gli studenti dovrebbero acquisire le conoscenze di base delle principali metodiche e strumentazione utilizzate nei laboratori biochimici e di analisi cliniche ed essere in grado di progettare esperimenti e risolvere i problemi pratici relativi all'identificazione, analisi e studio di funzioni delle biomolecole

 

Programma

  • ITALIANO
  • ENGLISH

Programma  CFU 5Costume donna blu da me Per da bagno con a blu scollo nero barchetta Barracuda

Introduzione alle metodologie biochimiche

Biochimica e' una scienza sperimentale, progettazione di esprimenti.

Enzimologia e inibizione

Enzimi come catalizzatori biologici e loro caratteristiche chimiche, coenzimi e gruppi prostetici, siti attivi (teorie della chiave serratura e dell'induce fit), barriera energetica, Cineitche enzimatiche di saturazione, ruolo del complesso ES, equazione di Michaelis e Menten, I significati di Km e Vmax, grafici del doppio reciproco, Inibizione competitiva, non competitiva e acompetitiva, ruolo de pH, allosteria

 Preparazione e manipolazione di campioni biologici.

Uso e preparazione di soluzioni tampone. Rottura di cellule; preparazione e purificazione di organelli cellulari; centrifugazione: centrifughe, rotori, centrifugazione differenziale e di isodensità all'equilibrio con esempi applicativi (separazione di organelli cellulari, purificazione di acidi nucleici in gradiente di sali). 

 Colture cellulari.

Colture primarie, secondarie, linee. Metodiche colturali. Tecniche cromatografiche ed elettroforetiche applicate all'isolamento, alla purificazione e all'analisi di sostanze di interesse biochimico e biochimico-clinico.  con taglia Celine 22 Collins Dress Gemma Nuovo tag Silver xA5w0tOgq

Procedure preliminari per la purificazione delle proteine

 considerazioni generali (resa di una purificazione), metodi di omogeneizzazione dei tessuti (metodi meccanici e non), precipitazione frazionata delle proteine (salting in and salting out)

 Metodologie per la purificazione delle proteine: Tecniche cromatografiche:

Generalità e definizioni.  Caratteristiche ed applicazioni delle cromatografie: di scambio ionico, di esclusione dimensionale (con esempi di determinazione del peso molecolare di proteine), di bioaffinità (con esempi di ligandi e strategie generali per il legame covalente dei ligandi alla fase stazionaria), di interazione idrofobica, di chelazione.

 Tecniche per l'analisi di proteine: Tecniche elettroforetiche:

principi generali: concetto di mobilità elettroforetica e relazione tra mobilità, carica, campo elettrico applicato, dimensioni. Relazione tra punto isoelettrico e mobilità delle proteine. Elettroforesi su strisce di acetato di cellulosa e separazione di siero proteine, tracciati patologici; elettroforesi su gel di poliacrilammide ( SDS-PAGE).  Tecniche di trasferimento di macromolecole dai gel (in particolare la tecnica del Western Blot). Isoelettrofocalizzazione. Elettroforesi bidimensionale (applicazioni allo studio del proteoma). Elettroforesi di acidi nucleici.                                                

 Metodi spettrofotometrici

Per lo studio delle molecole biologiche ed in enzimologia: generalità e definizioni. Spettri di assorbimento con esempi di spettri di molecole di interesse biochimico: proteine, acidi nucleici, NAD, citocromo c, citocromo P-450. Legge di Lambert-Beer e dosamenti quantitativi. Esempi di dosamenti: dosamento delle proteine e di enzimi: unità di attivita' enzimatica, attività specifica, fattore di arricchimento durante una purificazione. Saggi enzimatici in cinetica ed a tempo fisso.  Esempi di determinazione di attività enzimatiche    Fluorimetria ed applicazioni in biochimica e microscopia delle cellule e tessuti. Luminometria e sistema luciferina-luciferasi. Dosamento spettrofotometrico del DNA.

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Principi di base della risonanza magnetica nucleare e della sua applicazione con le proteine.

Esempi di purificazione di proteine

Purificazione della DNA polimrasi da Thermus aquaticus, purificazione da Escherichia coli,

purificazione usando his-tag, purificazione di proteine da membrana, purificazione da organi e dalle cellule di mammifero HEK293

 Saggi immunologici.

Nozioni su antigene e anticorpo, anticorpi monoclonali e loro preparazione. Sistemi di dosamento immunologico basati sulla immunoprecipitazione e sulla marcatura di antigeni od anticorpi con enzimi (ELISA) e (RIA).

Metodi biochimici nell'analisi delle interazioni molecolari

Equilibri di legami, legame ad un unico sito, la competizione di legame, il legame non specifico, la cinetica di legame, analisi sperimentale degli equilibri di legame (metodi spettroscopici, metodi basati sulla separazione molecolare, risonanza plasmonica di superficie)

Metodi per l'analisi delle interazioni proteina-proteina

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Cromatografia di affinita', co-immunoprecipitazione, cross-linking, cenni sui metodi generici

 

 

Modalità di insegnamento

Il corso prevede lezioni teoriche, il supporto e l'accessibilità delle slides di lezione e degli appunti ed esercizi dimostrativi e pratici in laboratorio su elettroforesi e cromatografia di proteine, determinazione attività enzimatica e costanti cinetiche.

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Modalità di verifica dell'apprendimento

L'esame puo' essere scritto e orale o solo orale e prevede la discussione di una relazione scritta relativa all'esperienze svolte in laboratorio (che sara' valutata da 0 a 3punti)

 L'orale comincera' con una correzione e approfondimento degli argomenti dello scritto e proseguira' con domande per valutare la conoscenza del programma  

 

Testi consigliati e bibliografia

K.Wilson, J. Walker -Biochimica e biologia molecolare - Raffaello Cortina Ed. Milano . 

M. Stoppini, V. Bellotti- Biochimica Applicata- EdiSES

D.L. Nelson, M.M Cox. I principi di Biochimica di Lehninger - Zanichelli, 6 edizione

M.C. Bonaccorsi di Patti, R. Contestabile, M.L. Di Salvo- Metodologie biochimiche- CEA

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    Ultimo aggiornamento: 26/06/2018 09:40
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